可溶性酸性转化酶(S-AI)检测|茁彩生物
可溶性酸性转化酶(S-AI,Soluble Acid Invertase)是一种在高等植物中广泛存在的酶,主要参与蔗糖代谢过程。它催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是植物糖类积累和利用的关键酶之一。
S-AI能够催化蔗糖水解为葡萄糖和果糖,检测其活性通常通过测定水解产物的生成量来实现。具体来说,S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,这些还原糖进一步与特定的比色试剂(如3,5-二硝基水杨酸)反应生成具有特征吸收光谱的化合物,通过测定该化合物的吸光度可以推导出S-AI的活性。
操作步骤:
准备反应体系,加入适量的蔗糖作为底物和提取的酶溶液。在适宜的酸性条件下(pH 4.5~5.5)进行孵育,生成葡萄糖和果糖。通过加入比色试剂(如DNS试剂或3,5-二硝基水杨酸)检测还原糖,生成有色化合物(如红棕色或棕红色氨基化合物)。在特定波长下(如540nm或510nm)测定吸光度,根据标准曲线计算糖的生成量,进而推导出S-AI活性。
优点:操作简便、成本低,适合实验室常规检测。
缺点:灵敏度较低,可能受到其他还原糖的干扰。