炎症因子系列
炎症因子
参与炎症反应的各种细胞因子。主要有肿瘤坏死因子—α(TNF-α)、白介素—1β(IL-1β)、白介素—6(IL-6)、转化生长因子—β(TGF-β)等。这类炎症因子阻碍肠外肠内营养支持提供的营养素合成人体组织,导致营养不良情况无法明显改善,如晚期癌症患者的营养不良情况。
下表是炎症因子相关指标:
炎症研究相关因子 | |||
sCD30 | MCP-1 | INF- γ | P-Selectin |
sCD40L | MIP-1 α | IL -1 β | TNF- α |
CRP | MIP- 1 β | IL -4 | TNF-R1 |
G-CSF | MIG | IL - 6 | IL-10 |
slCAM-1 | PECAM - 1 | IL - 8 | IL-12p70 |
IFN- α | E-Selectin | IL -13 | IL-17A |
样本收集方法
血清:全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。
血浆:抗凝剂推荐使用EDTA钠盐,样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂样品。
组织匀浆:用预冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1: 9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9 mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液5000×g离心 5-10分钟,取上清检测。
细胞提取液:贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5分钟后收集细胞;悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS 洗涤3次。每 1×106 个细胞中加入150-200μL PBS重悬并通过反复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少PBS的体积)。将提取液于1500×g离心10分钟,取上清检测。
细胞培养上清或其他生物体液: 1000×g 离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
注意事项
血清,血浆,组织等常规样本用冻存管或者EP管-80°保存;
管盖密封,防止漏液;
记号笔做好标签,便于统计
多余样本自行备份
干冰运输
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