实验收费标准：

 服务介绍：

       通过电泳区分不同的蛋白组分，并转移至固相支持物（膜），通过特异性试剂（抗体）作为探针，对靶物质进行检测。可检测到低至1～5ng（最低可到10～100pg）中等大小的靶蛋白。

 实验结果展示：

 实验流程：

Western Blot实验步骤

         1、 细胞总蛋白提取

       （1）对于悬浮细胞: 离心收集细胞，每106细胞加250 ul  RIPA（在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。如果需要提高蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。

       （2） 对于贴壁细胞:

         ① 用TBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻底吸干残留液。

         ② 加入适当体积的 RIPA（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5min。期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。

         ③ 用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。

       （3） 冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

       （4） 12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

         2、 组织蛋白提取：

       （1） 组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。

       （2） 将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

       （3） 12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

         3、 蛋白浓度测定：BCA法侧蛋白浓度

         4、 SDS-PAGE电泳

       （1） 清洗玻璃板

       （2）灌胶与上样

         ① 将玻璃板对齐后放入夹中卡紧，操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。

         ② 按实验安排配制分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。大约45min后可倒去胶上层水并用吸水纸将剩余水吸干。

      分离胶配比

 外包服务流程：